miR-20a/106b对成肌细胞增殖和分化作用的研究

【摘要】microRNAs在骨骼肌发育过程中起着重要的调控作用。基因芯片研究发现miR-20a和1niR-106b在成肌分化过程中有动态表达,但其对肌原细胞增殖和分化的调节机制尚不明确。生物信息学分析预测niiR-20a和1niR-106b分别可能结合到生肌调节因子Myf5和Akt3基因mRNA的3’非编码区(3’-UTR),进而对成肌分化进行调控。本文利用肌原细胞C2C12建立体外成肌分化模型,深入探讨了miR-20a通过调控Myf5表达和miR-106b通过调控Myf5/Akt3表达进而影响肌原细胞增殖和分化的分子机制。取得研究结果如下：1.BHK-21细胞中转染miR-20a和miR-106bmimics可下调包含有Myf53’-UTR的双荧光素酶报告载体的酶活性,而当载体中miR-20a和miR-106b种子序列发生突变或细胞内miR-20a和miR-106b的表达被抑制后,双荧光素酶活性得到了回复。在C2C12细胞中超表达miR-20amimics可抑制MYF5蛋白的表达,若同时转染miR-20ainhibitor则可回复其表达水平。这些结果表明miR-20a能作用于Myf5mRNA的3’-UTR,下调Myf5的表达；1niR-106b能作用于Myf5mRNA的3’-UTR。2.BHK-21细胞中转染miR-106bmimics可下调包含有Akt33’-UTR的双荧光素酶报告载体的酶活性,而当载体中niR-106b中子序列发生突变或细胞内miR-106b的表达被抑制后,双荧光素酶活性得到了回复。3.在C2C12细胞中分别超表达miR-20amimics或niR-106bmimics,然后进行流式细胞分析,发现G1期细胞数目均显著增多,这说明miR-20a和miR-106b均可将C2C12细胞阻滞在G1期,调节成肌细胞的增殖和分化。综上所述,在成肌分化过程中miR-20a通过对靶基因Myf5表达调控和miR-106b通过对靶基因Myf5和Akt3的表达调控来影响肌原细胞的增殖和分化过程。
【作者】于静；
【导师】雷霆；杨在清；
【作者基本信息】华中农业大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】miR-20a/106b；成肌分化；Myf5；Akt3；细胞周期；

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